Mise en évidence et l’activité biologique des phytoconstituants de la plante médicinale Rubia tinctorum L.

Abstract

Ce travail vise à mettre en évidence les constituants phytochimiques des parties aériennes et racinaires de la plante Rubia tinctorum en utilisant des solvants avec différents polarités, ainsi que d'évaluer leurs activités biologiques in vitro et in vivo. Six extraits ont été préparés par macération et les huiles essentielles par hydrodistillation. Les éléments minéraux et nutritionnels ont été estimés en utilisant des réactions chimiques. Les teneurs en polyphénols ont été déterminées par des techniques spectrophotométriques. Les activités antioxydantes ont été déterminées, in vitro, à travers les tests d‘évaluation suivants : TAC, DPPH˙, CUPRAC, et FRAP. L‘activité anti hémolytique a été déterminée en utilisant un modèle d'érythrocytes. En outre, la détermination de l‘activité antimicrobienne a été réalisée par la méthode de diffusion des disques en milieu gélosé et celle des dilutions en milieu liquide. L‘analyse quantitative et qualitative des extraits actifs a été réalisée par LCESI-MS/MS et le criblage phytochimique, respectivement. L‘analyse des huiles essentielles a été déterminée par GC-MS. Le test de toxicité aiguë a été évalué en administrant une dose unique de 2000 mg/kg de l'extrait ; l'anémie a été induite par l'administration de 40 mg de phénylhydrazine par injection intrapéritonéale pendant deux jours. De plus, le pouvoir antianémique a été évalué en mesurant les paramètres hématologiques après 15 jours de traitement. L‘analyse des éléments minéraux et nutritionnels a révélé la richesse des deux parties en lipides, en sucre et en fer. Les résultats de l‘analyse qualitative ont montré la présence de plusieurs phytoconstituants dont les tannins, les phénols, les flavonoïdes et les alcaloïdes trouvés dans tous les extraits. Alors que, le profil LC-ESI-MS/MS de l'extraction n‘a révélé que 11 composés bioactifs qui ont pu être extraits par tous les différents types de solvants (acide fumarique, acide chlorogénique, acide hydroxybenzoique, acide vanillique, catéchine, epicatéchine, acide caffeique, acide protocatéchine, acide trancinnamique, acid p-couarique, et 4-hydroxybenzaldehyde) avec des différences dans leurs quantités. Par ailleurs, l'analyse de l'huile essentielle GC-MS a permis d'identifier et de quantifier six composés chimiques. Les principaux constituants étaient la cyclohexanone (88,74 %), le diplodialide b (3,5 %) et le phytol (2,4 %). Le dosage des composés phénoliques a montré la richesse de l‘extrait hydrométhanolique de la partie aérienne en tannins (134.11 mg EAG/g Ms), tandis que l'extrait hydrométhanolique de la partie racine présente des valeurs plus élevées en flavonoïde et en teneur phénolique avec 45.29 mg/EAG/gMS et 118.38 mg EAG/gMs respectivement. En outre, l'extrait hydrométhanolique de la partie aérienne (MF) a révélé le pouvoir antioxydantle plus élevée pour le DPPH (83,23%) et le FRAP (1,51 ±0,22). L'extrait hydrométhanolique de la racine a montré le potentiel le plus élevé pour le TAC (61.09%) et l'activité antihémolytique (85,99%), tandis que l‘extrait aqueux de la partie aérienne a montré la meilleure capacité de réduction des ions cupriques (1899.18 mg TEAC/100 ml). Concernant l'activité antimicrobienne, les huiles essentielles et l'extrait d‘éthyle éther de la racine ont eu le meilleur effet contre cinq souches, avec des zones d'inhibition variant entre 06 et 19 mm. Les résultats des tests toxicologiques effectués in vivo, ont montré que la DL50 de tous les extraits était supérieure à 2000mg/kg, néanmoins, l'extrait di éthyle éther des racines a induit une hémolyse des globules rouges chez les rats traités et une augmentation de certains paramètres biochimiques (créatinine, urée, TGP, et TGO). Enfin, les extraits sélectionnés ont montré un effet anti anémique, cette activité est exprimée par le rétablissement des valeurs de HB, GR, HT, PCV, et MCH avec une certaine différence dans les degrés d‘influence. La meilleure activité a été remarquée dans les groupes traités par l‘extrait aqueux des racines. Dans l'ensemble, notre étude pourra contribuer à valoriser la plante testée dans le domaine pharmaceutique en tant que source de nombreuses substances antioxydantes, antimicrobiennes et antianémiques.