Purification et caractérisation biochimique des polyphénol oxydases de quelques variétés des dattes d’Algérie.

Abstract

Ce travail rapporte une purification des PPO extraites de quatre variétés des dattes algériennes par une procédure de trois étapes impliquant une précipitation par le sulfate d’ammonium suivie d’une chromatographie échangeuse d'ions Q-Sepharose bb et une chromatographie HPLC de gel filtration.Le taux de purification et le rendement ainsi estimés étaient de (7.92%et 14.7%),(82% et 23%) (79% et 20%),(80%et 16%), pour les PPOs de Deglet nour,Ghars,Tadela et Tantbouchet,respectivement.En appliquant SDS-Page,les PPOs de Ghars ,Tantbouchet et Tadela ont révélé des poids moléculaires équivalents à 30,67 et 90kD respectivement, tandis que trois isoformes ont été observés pour la PPO de Deglet Nour( 20,40 et 64kDa).Les PPOs des dattes sont pourvus des deux activités o-diphnéolase et triphénolase alors qu’aucune activité monophénolase n’a été détectée. L’activité optimale des PPOs des dattes a été enregistrée dans le domaine acide avec stabilité thermique entre 30-60°C et ceci en utilisant le catéchol,le pyrogallol et le 4-méthylcatéchol comme substrats. Une meilleure efficacité catalytique a été obtenue vis-à-vis de 4-methylcaétchol pour le cas des PPOs de deglet Nour et Ghars par contre Le catéchol présente plus d’affinité pour les PPOs de Tadela et Tantbouchet.Aucun effet significatif n’a été observé en présence des détergents, et ions métalique (Na+ et K+) or les ions Cu+2,Fe+2 et Zn+2 agissent entant qu’activateurs et les ions Ca+2, Cd+2 et Al+ entant qu’inhibiteurs.L’effet d’une liste d’inhibiteurs comprenant les sulfites, les fluorures, les acides organiques et les acides aminés sur les PPOs des dattes a été étudié en utilisant le catéchol et le pyrogallol comme substrats. Le métabisulfites de sodium,le fluorure de sodium,la L-cystéine ainsi que l’acide ascorbique ont présentés une inhibition efficace des brunissement enzymatique des dattes.Leur valeurs d’IC50,Ki ainsi que leur mécanismes d’inhibition ont été rapportés. L’efficacité d’inhibition dépend de la source d’enzyme et le substrat utilisé.L’inactivation thermique des PPOS des dattes a été réalisé dans l’intervalle de température compris entre 60-80°C.La cinétique d’inactivation a été décrite par le model de premier ordre pour les PPOs de Ghars,Tadela et Tantbouchet et par un modèle biphasique pour le cas de la PPO de Deglet Nour.Les paramètres cinétique (K,D,t1/2,et Zt)et thermodynamiques(ΔH, ΔG et ΔS) ont été aussi calculés. Les PPOs de Tantbouchet et Tadela semblent être plus stables par rapport à celles de ghars et Deglet Nour .De même,lL’acticité triphénolase présente plus de sensibilité vis-à-vis de changement de température en la comparant avec celle de l’acticité o-dipéhnolase. .